市場上的胎牛血清種類繁多,魚龍混雜,很多科研工作者,特別是剛接觸細胞培養(yǎng)的人,難以分辨血清質(zhì)量的優(yōu)劣。本人根據(jù)十多年來血清生產(chǎn)銷售的經(jīng)驗,總結(jié)如下:
一、外觀
拿到胎牛血清,先接觸的是血清外觀,對于缺少細胞培養(yǎng)經(jīng)驗的人來說,外觀的判斷尤為重要
1、顏色
根據(jù)血紅蛋白含量的不同,胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色,我國的細胞培養(yǎng)用血清標準是不高于20mg/d,實際上, 血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響,這個指標的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴謹規(guī)范程度,良好的操作能降低血清的游血。國產(chǎn)血清的采血點很分散。大多是由屠戶采血后馬上離心收集,所以很少會有溶血,表現(xiàn)出明亮的蠟黃色。 當然,國產(chǎn)血清也很少有標準意義上的胎牛業(yè)消。進口胎牛血消或多或少總有點浴血,因為真正的胎牛血清凝血功能差,紅細胞容易破裂。總的來說。 國產(chǎn)的血清呈現(xiàn)出蠟黃。進口的血清,質(zhì)量*好的呈現(xiàn)出談黃、微紅色,如SERANA S-FBS-US-015. 差點的呈現(xiàn)出硫紅色或鮮紅色。當然,熱天活血清或保存不當?shù)难澹?由于血紅蛋白的破壞氧化, 會呈現(xiàn)出暗紅,甚至咖啡色。
2、沉癥
很多血清客戶, 會發(fā)現(xiàn)進門血清有沉視, 從面懷疑血請的質(zhì)量問題,這是沒有根據(jù)的。血清中的沉定是由纖維蛋白的凝鑒產(chǎn) 對面清動量沒有任何影明。 沉浪的產(chǎn)生原因很多。 家的加工生產(chǎn)方式密切相關。國產(chǎn)的血清,大多來自北方,由于價格低廉,保存環(huán)境都不好,從采血、冷凍、運輸?shù)缴a(chǎn)會經(jīng)過多次凍融,每次凍融過程,就會析出部分纖維蛋白沉淀,這樣,血清成品過濾后看起來反而更加的“干凈”,很少有沉淀產(chǎn)生。
進口的胎牛血清,過濾分裝前很少會反復凍融,生產(chǎn)后的成品也是清激的,但隨著時間的推移,血清中的大量纖維蛋白會析出形成沉淀。當然,進口的新生牛血清,一般牛齡都在2周左右,血清中的各種蛋白含量明顯偏高,生產(chǎn)后血清可能會渾獨,甚至有大量沉淀。當然,購買回來的血清都是冰凍狀態(tài),使用時需要融化,融化過程*好在溫度較低的狀態(tài)下慢慢進行,否則沉淀相對較多,雖然沉淀并不直接影響血清的質(zhì)量,但對細胞的顯微觀察有一定的阻礙。
3、澄清度
進口胎牛血清由于蛋白和脂類等物質(zhì)含量低,表現(xiàn)為稀薄、清淡,而國產(chǎn)血清,因為絕大多數(shù)是新生牛血清,相對而言更加粘稠,顏色略深,這對于初步接觸血清的人很難判斷,但把兩者進行對比,可容易分辨。
胎牛血清注意事項:
1. 血清解凍與存放:-20℃取出后建議放入2~8℃冰箱中解凍約,每隔一段時間輕輕搖晃均勻,不可直接放入溫度較高處解凍,避免因溫度改變太大,造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀,血清的質(zhì)量下降。若短期無法用完一瓶,建議無菌分裝,再放回冷凍,避免反復凍融。4℃長時間保存后血清中的變性脂蛋白及纖維蛋白,形成絮狀物質(zhì)變差。
2. 血清是否滅活:加熱可滅活血清中補體系統(tǒng),在極少數(shù)情況下(培養(yǎng)ES細胞,平滑肌細胞時)建議滅活,在培養(yǎng)其余細胞時不建議滅活血清。血清滅活非常容易產(chǎn)生沉淀,如必須滅活請按56℃,30 min,輕微搖晃原則操作,滅活溫度高、時間長、搖晃不均都容易產(chǎn)生沉淀。
3.無血清培養(yǎng)基:無血清培養(yǎng)基在結(jié)果重復性、細胞體外分化方面有優(yōu)勢,但是,血清仍然是培養(yǎng)液中最基本的添加物,尤其是在原代培養(yǎng)或細胞生長狀態(tài)不良時,常常會先使用有血清的培養(yǎng)液進行培養(yǎng),待細胞生長旺盛后再換成無血清培養(yǎng)液。